實驗室規(guī)劃設(shè)計--PCR實驗室建設(shè)方案、規(guī)劃設(shè)計
PCR試驗室又名基因擴增試驗室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒错?PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技能，用于擴大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA仿制。經(jīng)過DNA基因追尋體系，能敏捷掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米等級，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否仿制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否反常改動能及時判別患者最適合運用哪類抗病毒藥物、判別藥物療效怎么、給臨床治療供給了可靠的查驗根據(jù)。規(guī)范的PCR試驗室規(guī)劃是什么樣的?
展開PCR試驗室應(yīng)具有的條件
1、有必要具有規(guī)范的的PCR熒光試驗室;
實時熒光定量PCR技能于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出 因為該技能不只實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，并且與常規(guī)PCR比較，它有特異性更強、有用解決PCR污染問題、主動化程度高級特色，現(xiàn)在已得到廣泛運用。
2、檢測設(shè)備有必要契合規(guī)范PCR熒光試驗室設(shè)置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+主動剖析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測體系?！ ?/span>
3、有必要經(jīng)過國家臨床查驗中心的查驗和認(rèn)證;
4、檢測人員有必要經(jīng)過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并獲得合格證書;
PCR試驗室內(nèi)工作人員有必要參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床查驗中心舉行的臨床基因擴增培訓(xùn)班，并持證上崗。PCR試驗室經(jīng)過查驗，試驗室至少有必要應(yīng)有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR試驗室有必要樹立嚴(yán)厲的試驗室管理制度、樹立規(guī)范化操作程序（SOP）、樹立系列質(zhì)量管理文件等，保證試驗室日常運轉(zhuǎn)契合國家衛(wèi)生部的要求，保證檢測成果精確、保證試驗室衛(wèi)生安全，保證試驗室長期安穩(wěn)運轉(zhuǎn)
5、有必要在無菌無塵環(huán)境下進行操作
下面介紹怎么樹立PCR試驗室
1、樹立樣品預(yù)備區(qū)
這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的預(yù)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采納預(yù)防措施：
⑴PCR產(chǎn)品和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。
⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進樣品預(yù)備間處理，以根據(jù)運用的需求提取DNA或RNA。
⑶用于樣品處理的東西不能被用作一般分子克隆的東西，也不能用作操作靶序列。
⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在汲取樣品時有氣溶膠遺留。
⑸大體積樣品應(yīng)該用獨自包裝的無菌一次性移液管汲取。
⑹管子翻開前都要簡略離心以削減氣溶膠的發(fā)生，并且管子不能用力崩開，這樣會發(fā)生氣溶膠。
⑺任何時候都應(yīng)該穿試驗服和帶手套，手套要常常替換，尤其在抽提過程中每一步之間都要替換。試驗服要專門用于樣品預(yù)備間，常常清洗?！ ?/span>
2、樣品預(yù)備和RNA-PCRRNA-PCR的額定過程需求額定的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的時機。為了防止這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步能夠在樣品預(yù)備區(qū)進行。在RNA-PCR中運用UNG以防止污染的辦法也有報導(dǎo)?！ ?/span>
3、樹立前PCR區(qū)?！ ?/span>
該去專門用于預(yù)備各種反響，這個區(qū)域有必要堅持潔凈，并且沒有來自克隆和樣品預(yù)備的污染。前PCR區(qū)有必要要有試劑和預(yù)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管?！ ?/span>
4、PCR試驗室試劑的操作?！ ?/span>
⑴所用的一切溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
⑵一切PCR試劑中運用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。
⑶在20℃到25℃儲存的試劑主張加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中參加0.025%的疊氮鈉不按捺擴增反響。
⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積制造，試驗一下看試劑是否滿足，然后分裝成僅夠一次運用的量進行儲存。
⑸一切試劑和樣品預(yù)備過程中都要運用一次性滅菌的瓶子和管子。
⑹新制造的試劑在用于預(yù)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以查驗。
⑺樣品預(yù)備和前PCR區(qū)所運用的移液管在不運用時都應(yīng)該當(dāng)心保存。
5、在前PCR區(qū)樹立PCR混合物?！ ?/span>
⑴能夠把立刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在試驗室只涉及到擴增一種或少量幾種特異序列時這樣做很有用。
⑵假如你的試驗室運用多套引物，以致于制造包含一切試劑的單一反響混合物不行經(jīng)濟，能夠考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個規(guī)矩，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來剖析樣品制造和PCR前過程的功率和潔凈程度。并且，你也希望經(jīng)過運用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里邊不含擴增按捺物。
⑷陰性樣品要與每組樣品一起做，以剖析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)品的污染，陰性對照應(yīng)該包含核酸以外的一切試劑。
⑸作為陽性對照時，有兩個理由決定了應(yīng)該運用最少量量的核酸。
⑹因為有必要有對照反響，對照模板的特色應(yīng)該予以考慮?！ ?/span>
6、操控污染的辦法?！ ?/span>
已規(guī)劃出很有力的酶學(xué)辦法用來消除一種方式的污染—運用UNG，這一技能能有用地消除由PCR產(chǎn)品引起的污染。另一種操控污染的辦法是運用紫外線，這種辦法不能徹底消除污染問題，但能夠?qū)⑽廴鞠陆祹讉€數(shù)量級。
7、后PCR區(qū)PCR完結(jié)今后，需求剖析樣品并解說數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反響后處理樣品的當(dāng)?shù)亍：驪CR活動中運用的所用試劑、一次性耗材和儀器都有必要是專門用于這一意圖，決不能把試驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。
展開PCR試驗室應(yīng)具有的條件
1、有必要具有規(guī)范的的PCR熒光試驗室;
實時熒光定量PCR技能于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出 因為該技能不只實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，并且與常規(guī)PCR比較，它有特異性更強、有用解決PCR污染問題、主動化程度高級特色，現(xiàn)在已得到廣泛運用。
2、檢測設(shè)備有必要契合規(guī)范PCR熒光試驗室設(shè)置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+主動剖析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測體系?！ ?/span>
3、有必要經(jīng)過國家臨床查驗中心的查驗和認(rèn)證;
4、檢測人員有必要經(jīng)過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并獲得合格證書;
PCR試驗室內(nèi)工作人員有必要參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床查驗中心舉行的臨床基因擴增培訓(xùn)班，并持證上崗。PCR試驗室經(jīng)過查驗，試驗室至少有必要應(yīng)有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR試驗室有必要樹立嚴(yán)厲的試驗室管理制度、樹立規(guī)范化操作程序（SOP）、樹立系列質(zhì)量管理文件等，保證試驗室日常運轉(zhuǎn)契合國家衛(wèi)生部的要求，保證檢測成果精確、保證試驗室衛(wèi)生安全，保證試驗室長期安穩(wěn)運轉(zhuǎn)
5、有必要在無菌無塵環(huán)境下進行操作
下面介紹怎么樹立PCR試驗室
1、樹立樣品預(yù)備區(qū)
這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的預(yù)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采納預(yù)防措施：
⑴PCR產(chǎn)品和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。
⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進樣品預(yù)備間處理，以根據(jù)運用的需求提取DNA或RNA。
⑶用于樣品處理的東西不能被用作一般分子克隆的東西，也不能用作操作靶序列。
⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在汲取樣品時有氣溶膠遺留。
⑸大體積樣品應(yīng)該用獨自包裝的無菌一次性移液管汲取。
⑹管子翻開前都要簡略離心以削減氣溶膠的發(fā)生，并且管子不能用力崩開，這樣會發(fā)生氣溶膠。
⑺任何時候都應(yīng)該穿試驗服和帶手套，手套要常常替換，尤其在抽提過程中每一步之間都要替換。試驗服要專門用于樣品預(yù)備間，常常清洗?！ ?/span>
2、樣品預(yù)備和RNA-PCRRNA-PCR的額定過程需求額定的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的時機。為了防止這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步能夠在樣品預(yù)備區(qū)進行。在RNA-PCR中運用UNG以防止污染的辦法也有報導(dǎo)?！ ?/span>
3、樹立前PCR區(qū)?！ ?/span>
該去專門用于預(yù)備各種反響，這個區(qū)域有必要堅持潔凈，并且沒有來自克隆和樣品預(yù)備的污染。前PCR區(qū)有必要要有試劑和預(yù)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管?！ ?/span>
4、PCR試驗室試劑的操作?！ ?/span>
⑴所用的一切溶液都應(yīng)該沒有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
⑵一切PCR試劑中運用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。
⑶在20℃到25℃儲存的試劑主張加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中參加0.025%的疊氮鈉不按捺擴增反響。
⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積制造，試驗一下看試劑是否滿足，然后分裝成僅夠一次運用的量進行儲存。
⑸一切試劑和樣品預(yù)備過程中都要運用一次性滅菌的瓶子和管子。
⑹新制造的試劑在用于預(yù)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以查驗。
⑺樣品預(yù)備和前PCR區(qū)所運用的移液管在不運用時都應(yīng)該當(dāng)心保存。
5、在前PCR區(qū)樹立PCR混合物?！ ?/span>
⑴能夠把立刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在試驗室只涉及到擴增一種或少量幾種特異序列時這樣做很有用。
⑵假如你的試驗室運用多套引物，以致于制造包含一切試劑的單一反響混合物不行經(jīng)濟，能夠考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個規(guī)矩，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來剖析樣品制造和PCR前過程的功率和潔凈程度。并且，你也希望經(jīng)過運用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里邊不含擴增按捺物。
⑷陰性樣品要與每組樣品一起做，以剖析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)品的污染，陰性對照應(yīng)該包含核酸以外的一切試劑。
⑸作為陽性對照時，有兩個理由決定了應(yīng)該運用最少量量的核酸。
⑹因為有必要有對照反響，對照模板的特色應(yīng)該予以考慮?！ ?/span>
6、操控污染的辦法?！ ?/span>
已規(guī)劃出很有力的酶學(xué)辦法用來消除一種方式的污染—運用UNG，這一技能能有用地消除由PCR產(chǎn)品引起的污染。另一種操控污染的辦法是運用紫外線，這種辦法不能徹底消除污染問題，但能夠?qū)⑽廴鞠陆祹讉€數(shù)量級。
7、后PCR區(qū)PCR完結(jié)今后，需求剖析樣品并解說數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反響后處理樣品的當(dāng)?shù)亍：驪CR活動中運用的所用試劑、一次性耗材和儀器都有必要是專門用于這一意圖，決不能把試驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。
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